Mirus Bio新上市轉染試劑TransIT?-AAViator，基于逆向工程，最大化的提升AAV滴度和實心率！
腺相關病毒 (AAV) 是基因治療中最廣泛使用的傳遞/遞轉機制。近年來，基于AAV病毒所開發(fā)的基因療法研發(fā)及臨床試驗注冊數(shù)量也呈指數(shù)級增長，也需要AAV病毒生產工藝及產能的不斷優(yōu)化及擴展，從最早基于貼壁細胞工藝升級轉換到以懸浮為主的200-2000L反應體系。 Mirus Bio成立于1996年，在核酸遞送領域深耕多年，于2021年8月推出GMP級別TransIT-VirusGEN® GMP 轉染試劑，支持AAV及LV從科研到GMP商業(yè)化生產。不同于傳統(tǒng)基于單組分的轉染試劑(如陽離子聚合物聚乙烯亞胺，PEI)，Mirus Bio將專利的多聚物及脂質技術進行多重組合，形成多功能性的轉染方案，克服細胞遞轉過程中的多重阻礙，以實現(xiàn)更高效轉染和更低細胞毒性，從而大幅度提升多種血清型AAV病毒生產載量。去年7月底Mirus上市RevIT? AAV Enhancer，已證明在不同AAV血清型別中，可提高AAV病毒基因組滴度1.2-4.9倍，并且在一定程度改善了實心率。更重要的是，RevIT? AAV Enhancer不僅可以搭配Mirus TransIT-VirusGEN® GMP 轉染試劑，也適配于其他轉染試(如PEI等)，使得AAV生產上游成本的進一步降低成為可能，進而降低了基因治療單劑量成本。下圖展示了國內客戶前期測試反饋結果，測試包括了不同血清型別的質粒設計，適用于國內及國外品牌的轉染試劑、細胞及培養(yǎng)基體系，實現(xiàn)了1.5-4倍以上的AAV病毒滴度提升。 RevIT Enhancer在國內客戶不同AAV項目平臺上的測試反饋結果 隨著國內外客戶項目及管線推進，已有越來越多的客戶將TransIT-VirusGEN® 轉染試劑以及RevIT? AAV Enhancer從搖瓶階段線性放大至200L-500L反應器，并且已應用到處于臨床申報產品中。ReciBioPharm 與Mirus Bio合作， Chris Brown(工藝流程開發(fā)部門)在線上(鏈接)展示了TransIT-VirusGEN 和RevIT? AAV Enhancer數(shù)據(jù)結果，并且比較了所有測試規(guī)模(搖瓶&反應器)，反饋病毒滴度放大效果非常好，并且實心率也保持相同水平，在 50 升的生物反應器中，也有著40%以上實心率。Chris Brown表示“選擇用TransIT-VirusGEN 和RevIT? AAV Enhancer產品，是基于我們以往的測試數(shù)據(jù)，允許最大限度地提高 AAV 產量。產量的提高，單個50 升生物反應器可生產更多劑量，從而降低單位劑量的成本。” 更多的，Bridgebio在poster中分享了基于AAV5型別，使用TransIT-VirusGEN® 轉染試劑以及RevIT? AAV Enhancer從搖瓶線性放大至200L反應體系(125mL搖瓶→2L → 10L → 200L)，病毒滴度和實心率數(shù)據(jù)結果(圖1)。與原有工藝相比 (Process A：PEIPro轉染 + Expi293細胞/培養(yǎng)基)，替換成TransIT-VirusGEN® 轉染試劑后的工藝流程 (Process B：TransIT-VirusGEN® 轉染試劑 + Expi293細胞 + BalanCD培養(yǎng)基；Process C：TransIT-VirusGEN® 轉染試劑 + VP2.0細胞 + BalanCD培養(yǎng)基)均有著更高的病毒滴度(圖2)和更低的宿主DNA和質粒DNA殘留。 圖1. 從125mL搖瓶線性放大至200L反應體系的病毒滴度和實心率數(shù)據(jù)結果 圖2. 采用Mirus的工藝平臺均有著更高的病毒滴度 Mirus Bio 并沒有止步于此，并于2024年10月7日重磅推出 TransIT®-AAViator AAV轉染試劑。繼續(xù)沿用Mirus Bio 多聚物及脂質兩組分的經典組合，不同的是應用逆向工程思維，基于現(xiàn)有RevIT? AAV Enhancer，從Mirus Bio多聚物及脂質庫中，分別篩選出更優(yōu)化的脂質和聚合物配方。新推出的TransIT®-AAViator轉染體系，進一步降低了 AAV工藝生產流程中所需質粒 DNA 和轉染試劑使用量，最大限度地提高不同AAV血清型滴度和實心率，從而提升 AAV生產工藝的總體生產效率。整合TransIT®-AAViator的AAV病毒上游生產工藝，無需通過細胞密度而調整試劑和質粒DNA加入量，并且實現(xiàn)了單個生物反應器的生產劑量的成倍增加，大幅度降低了單位劑量的成本，為基于AAV 病毒的基因治療開發(fā)提供了更優(yōu)的解決方案。 產品詳情 產品名稱: TransIT®-AAViator Transfection System 上市日期：2024年10月7日 產品貨號: MIR 73750 / MIR 73745 產品組分：TransIT®-AAViator轉染試劑及RevIT? AAV增強子 Mirus Bio AAV病毒生產相關轉染試劑產品參數(shù) * HDPE材質管/瓶 *只針對30 mL以及150 mL 規(guī)格試劑 **只針對150 mL 規(guī)格試劑 TransIT-AAViator®提升AAV生產效率&降低單劑量成本 生產劑量的成倍增加 隨著AAV病毒滴度的提升，單個反應器所允許生產劑量也成倍的增加，從而大幅度降低單劑量成本。 減少生產所需批次 提高AAV病毒生產總產量，減少每次生產的所需批次數(shù)量或擴大生物反應器規(guī)模才可滿足生產需求，緩解了由于產能不足等諸多限制。 減少質粒DNA用量 TransIT®-AAViator 轉染系統(tǒng)，降低了至少一半質粒 DNA使用量 ，同時仍可保持高水平的滴度和實心率，進一步降低了批次生產成本。 加快工藝開發(fā)進程 TransIT®-AAViator 轉染系統(tǒng)，只需較少實驗優(yōu)化，即可獲得最佳結果，從而縮短了工藝開發(fā)時間，加快了產品上市速度。 TransIT®-AAViator有著更高滴度和實心率 使用不同的質粒設計(GFP基因-圖3；RPE65 基因-圖4)，平行比較TransIT®-AAViator 轉染系統(tǒng)與“Poly F”(Polyplus FectoVIR® 病毒轉染試劑)以及“Poly P” (Polyplus PEIpro®病毒轉染試劑)。實驗結果顯示，在不同AAV血清型別中 (AAV5、8、9)，TransIT®-AAViator 轉染系統(tǒng)有著更高的病毒滴度及實心率，當質粒設設計替換成治療性基因(RPE65 基因)，病毒滴度及實心率相比于競爭品牌，其優(yōu)勢更加顯著。 圖3. 轉染GFP基因質粒的AAV滴度 圖4. 轉染RPE65基因質粒的AAV滴度 TransIT®-AAViator降低質粒DNA用量 TransIT®-AAViator轉染系統(tǒng)，在較低質粒 DNA 用量仍可得到高水平AAV病毒滴度及實心率（圖5）。 圖5. 實驗使用TransIT® -AAViator轉染試劑(試劑:DNA比例為1.25:1,vol:wt)，以 1:1:1 的質粒質量比轉染 pAAV-WPRE-GFP (Aldevron), pAAV-Helper (Aldevron) 和 pAAV-RepCap (AAV9 Genemedi)三質粒。轉染時加入RevIT AAV Enhancer（1 μl/mL），轉染后 72 小時使用化學裂解法收獲 AAV病毒。 TransIT-AAViator實驗流程 Step 1: 轉染前，需保證生長在培養(yǎng)基中的懸浮 HEK 293 細胞活率 > 95%。 Step 2: 轉染時：建議細胞密度為 ~ 3 × 10E6 cells/mL，TransIT®- AAViator 試劑與DNA 加入比例為1:1 - 1.5:1，每 1 mL 培養(yǎng)基加入RevIT AAV Enhancer 0.5 - 1.5 μl；靜止條件下孵育15-45 分鐘，以便形成轉染復合物，然后輕柔的加入細胞中。 Step 3: 轉染后無需更換培養(yǎng)基，一般可在轉染后 48-72 小時收獲AAV病毒。 客戶案例分享 最新線上webinar：Enhancing AAV Production: A Novel Transfection System for Cell and Gene Therapy Applications (鏈接) 演講者信息： Webinar內容一覽： 通過該線上Webinar，可了解TransIT®-AAViator 轉染系統(tǒng)，包括了開發(fā)初衷、數(shù)據(jù)性能對比及展示等。來自Affinia Therapeutics 高級工藝開發(fā) Michael White， 強調了該轉染系統(tǒng)的可擴展性和工作流程的易整合性，是想要優(yōu)化上游工藝和增加整體成本效益的理想選擇。 此外，Michael White分享了 Affinia Therapeutics AAV轉染平臺體系納入TransIT®-AAViator 轉染系統(tǒng)經驗，強調該系統(tǒng)能夠降低質粒DNA用量，同時也在不同規(guī)模中進行了測試(搖瓶-3L反應器)，可穩(wěn)定的保持高水平滴度，從而大幅度提高了生產工藝的效率，同時降低了AAV病毒生產成本。 討論重點包括： Affinia 比較了新一代轉染系統(tǒng)TransIT®-AAViator與當前使用的平臺工藝； Affinia 在將TransIT-AAViator® 與其他試劑性能進行比較中，如何優(yōu)化使其性能顯著優(yōu)于其他轉染試劑； 整合TransIT®-AAViator轉染系統(tǒng)，相比于優(yōu)化前實現(xiàn)了3 倍滴度提升及 70% 實心率。 小結 新一代專為優(yōu)化AAV 生產工藝而推出的轉染試劑: TransIT®-AAViator 轉染系統(tǒng)： 與基于單個組分(如PEI)轉染試劑不同，可顯著的提高不同AAV 血清型別的滴度及實心率； 有著更低轉染試劑及質粒DNA使用量需求，同時保持高水平的AAV滴度及實心率； 相比于競爭品牌(FectoVIR&PEIpro等)，有著更高基因組滴度及實心率，并且質粒設計為治療基因，其優(yōu)勢更加顯著。 相關產品信息及鏈接 產品名稱 規(guī)格 貨號 NEW! TransIT®-AAViator Transfection System 2 x 1.5 ml MIR 73750 1 × 30 ml MIR 73745 RevIT? AAV Enhancer 1.5 ml MIR 8000 10 x 1.5 ml MIR 8006 75 ml MIR 8080 NEW! RevIT? GMP AAV Enhancer 200 ml MIR 8200-GMP VirusGEN® AAV轉染試劑及RevIT? AAV Enhancer For 1L of Culture MIR 8007 For 10L of Culture MIR 8008 TransIT-VirusGEN®轉染試劑 0.3 ml MIR 6703 0.75 ml MIR 6704 1.5 ml MIR 6700 5 x 1.5 ml MIR 6705 10 x 1.5 ml MIR 6706 30 ml MIR 6720 TransIT-VirusGEN® GMP級別轉染試劑 150 ml MIR 6845-GMP VirusGEN® AAV轉染試劑(套裝) 1 kit for 1 L of cell culture MIR 6750 VirusGEN® GMP級別AAV轉染試劑(套裝) 1 Kit - for 50 L of cell culture MIR 6815-GMP VirusGEN® LV轉染試劑(套裝) 1 kit for 1 L of cell culture MIR 6760 VirusGEN® GMP級別LV轉染試劑(套裝) 1 Kit - for 50 L of cell culture MIR 6825-GMP Mirus成立于1995年，始終秉承著為基因遞轉提供優(yōu)化方法及高效的工具。憑借超過 25 年轉染領域的深根細作，獲得了多項技術突破，已成為核酸遞送領域的全球領導者和值得信賴的品牌。Mirus科學家團隊不斷突破轉染技術的極限，推出了VirusGEN®轉染試劑與RevIT?增強劑，進一步提升AAV/LV產量，助力推動生物治療藥物的降本增效，為CGT領域客戶賦能。 北京西美杰科技有限公司是Mirus中國區(qū)代理，始終秉承著專業(yè)、嚴謹?shù)膽B(tài)度為客戶提供優(yōu)質的產品與服務。如果您對上述產品感興趣，歡迎致電北京西美杰客服熱線400-050-4006或登錄網站www.mingyuwujin.cn了解更多產品信息。
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